1990年，刘玉翠凭借电影《庙街皇后》获得第10届香港电影金像奖最佳女配角奖和最佳新人奖并入围第27届台湾电影金马奖最佳女配角奖。1992年，出演由曹建南执导的恐怖动作电影《花货》，在剧中饰演夜总会歌星明头。同年，由新艺宝公司发行首张专辑《Not So Sorry》。

1993年，接着又推出第二张同名专辑《刘玉翠》。同年，获得香港十大中文金曲最有前途新人奖女歌手铜奖。1995年，刘玉翠与狄龙，廖启智，黄日华等出演由庄伟健监制的古装破案剧《包青天》。

1997年，与黄日华、樊少皇、陈浩民共同出演根据金庸同名小说改编的古装武侠剧《天龙八部》，并凭借在剧中饰演的冷血残忍的阿紫一角受到观众的关注；同年，刘玉翠与陈小春、马浚伟、梁小冰等出演由香港TVB出品的古装武侠电剧《鹿鼎记》，在剧中饰演娇生惯养且刁蛮泼辣的建宁公主。

2000年，参与拍摄香港无线电视出品的民国家族剧《酒是故乡醇》；2001年，出演由陈浩民、温碧霞、苑琼丹主演的古装神话剧《封神榜》。2002年，与林峰、叶璇、马德钟共同出演根据清代女作家陈端生的长篇弹词小说改编的古装剧《再生缘》。

2003年，出演由香港电视广播有限公司出品的长篇处境喜剧《皆大欢喜》。2006年，出演由林志华执导时装剧集《爱情全保》，凭借该剧获得TVB万千星辉颁奖典礼最佳女配角奖提名。2008年，出演由郭晋安、郭羡妮主演的TVB时装剧《古灵精探B》，在剧中饰演于子朗的阿姨简致美。

2009年，出演由潘嘉德监制的TVB古装武打剧《王老虎抢亲》，剧中饰演王老虎姑姐王桂菲；随后又与欧阳震华、宣萱、陈山聪共同出演TVB古装悬疑剧《施公奇案Ⅱ》。2010年，出演由梁材远监制清装剧《蒲松龄》；同年，她又参与拍摄由广东电视台出品的家庭喜剧《妹仔大过主人婆》。

2011年，刘玉翠跟无线约满后离开TVB转投香港电视网络。2012年，参与拍摄由香港电视（HKTV）制作的时装医务剧《三面形医》，在剧情饰演赵彩琼。2014年，参与拍摄由银都机构、寰宇娱乐及北京剧魔影业出品的情感电影《可爱的你》。

2015年9月，刘玉翠与罗家英搭档出席第20届华鼎奖“上汽大众辉昂之夜”中国电影满意度调查发布盛典并担任颁奖嘉宾；10月，受邀参加电视谈话性节目《鲁豫有约》讲述浮华背后的辛酸之路，鲜为人知的背后生活；11月，刘玉翠参与由北京卫视语言竞技真人秀节目《我是演说家》第二季的录制；12月，刘玉翠出席国剧盛典担任颁奖嘉宾，并演唱粤语歌曲《偏偏喜欢你》。

2016年4月，刘玉翠与彭皓锋合作主演由陈奕铭执导的古装剧《七娃抓妖记》。6月，刘玉翠友情出演电影《米国的星空》。7月，刘玉翠参加安徽卫视姓氏文化寻根节目《百家姓》录制。8月，参演由潘镜丞执导的都市爱情剧《北京遇上西雅图》杀青；9月，刘玉翠参演根据潇湘冬儿小说《11处特工皇妃》改编的古装爱情穿越剧《特工皇妃楚乔传》杀青，在剧中饰演宇文府管家宋大娘；10月，刘玉翠参演都市神仙爱情喜剧电影《神仙也疯狂》；10月底，参演的都市时尚轻喜剧电影《我的网红女友》杀青。

2017年，刘玉翠出演青春偶像剧《龙日一，你死定了》，在剧中饰演女主角张静美的妈妈；同年，刘玉翠主演由黄飞鹏执导电影《蚪尾》，凭借在影片中的精湛的演技、丝丝入扣的表演，荣获欧洲瑞典影展以及欧洲罗马影展两大影展最佳女主角。2018年，刘玉翠与白鹿、许凯合作出演由郑伟文执导的古装仙侠剧《招摇》，在剧中饰演南月教独孤修。

2019年，参与录制的互动挑战类综艺节目《王牌对王牌》第四季第7期在浙江卫视播出。同年，确认参演于荣光执导的古装武侠剧《天龙八部》杀青，她在剧中饰演阿紫和阿珠的生母阮星竹，与杨祐宁、文咏珊、何泓姗等人合作。